|
Résumé :
|
L'application des techniques de biotechnologie pour la multipl ication massive et l'amélioration génétique de l'olivier est entravée par la récalcitrance de cette espèce. Notre étude s'inscrit dans le cadre des travaux de recherche menés au laboratoire de culture in vitro concernant la micropropagation de l'olivier (Olea europaea L.). Deux techniques de micropropagation ont fait l'objet de cette étude, l'embryogenèse somatique et le mi crobouturage. Dans la première partie, l'embryogenèse somatique a été induite soit à partir du materiel zygotique ou à partir de tissus maternels rajeunis des deux variétés Dahbia et Arbequine. Dans un premier temps les cotylédons et radicules prélevés sur des embryons zygotiques stérilisés ont été mis sur trois milieux d'induction différents afin d'évaluer l'effet de 3 types de cytokinines: 1) OMc + 25 IlM AIE + 2,5 IlM 2iP; 2) OMc + 25 IlM AIE + 2,5 IlM TDZ; 3)- OMc + 25 IlM AIB + 2,5 IlM Zéatine ; pendant 3 semaines pour être transférés sur le même milieu de base dépourvue de cytokinine pour 4 semaines. Les taux de callogenèse les plus élevés ont été observés sur les milieux additionnés de 2iP (100 % pour les cotylédons d'Arbequine) et de TDZ (92% pour les cotylédons d'Arbequine). Les cals ont été transférés par la suite sur 6 milieux d'expression différents ayant comme base minérale le milieu OM. Les embryons somatiques ont été obtenues uniquement à partir de cals ayant été cultivés sur le milieu OMc additionné de 25 IlM AIB et de 2,5 IlM 2iP pour l'induction. Les meilleurs taux d'embryogenèse somatique (11,6%) étaient obtenus lorsque le milieu d'expression était additionné de 0, 25 IlM AIE, 0,5 IlM 2iP, 0,44 IlM BAP, 3g/1 de phytagel et dépourvu de cepfodoxime .En outre, la variété qui a répondu le mieux est Arbequine lorsque les radicules sont utilisées (11,6%). Dans une autre expérience nous avons induit l'embryogenèse somatique à partir de bourgeons adventifs obtenus sur des pétioles mis dans un milieu MSI2 additionné de 0,5 !lM ANA, 30 !lM TDZ, 30g/1 de saccharose et 6g/1 du bactoagar. Les cals ont été obtenues après 3 semaines de culture sur le milieu OMc additionné de 25 IlM AIE et 2,5 IlM 2iP, l'expression était testée sur le milieu OM additionné de 0, 25 IlM AIB, 0,5 IlM 2iP, 0,44 IlM BAP et 3g/l phytagel , mais aucun embryon somatique n'a été obtenu. Dans la deuxième partie nous avons réalisé un essai de microbouturage à partir de deux variétés Picual et Dahbia, les pousses feuillées ont été prélevées sur du matériel entretenu pendant deux années dans la chambre de culture, les explants ont été divisés en 7 groupes; chaque groupe a été mise en culture dans le milieu de base MS additionné de différentes combinaisons hormonales (2mg/1 de zéatine, 2mg/1 de 2iP, 2mg/1 de TDZ, 2mg/1 de BAP, 1mg/1 de zéatine+1mg/1 de 2iP, 1mg/1 de zéatine +l mg/l de TDZ, lmg/l de zéatine+1mg/1 de BAP ). Après 6 semaines de culture et en comparant les cytokinines utilisées, la zéatine est celle qui a montré un nombre moyen élevé de pousses feuillées développées par expIant (1,5chez Dahbia, et 1,4 chez Picual). Ainsi la zéatine a montré une élongation de pousses plus importante par rapport aux autres cytokinines, notamment chez la variété Dahbia (4,01 cm) L'essai d'enracinement a été fait en utilisant les mêmes concentrations de cytokinines et en ajoutant Img/l d'AIB, à chaque traitement après 3 semaines de culture aucun développement de racines n'a été observé. Mots clés : Arbequine, Dahbia, Picual, callogenèse, cytokinines, embryogenèse somatique, embryon zygotique, explants somatique, Olea europaea L.
|
